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本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人c-myc 癌基因产物(c-myc)水平。用纯化的人c-myc 癌基因产物(c-myc)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入c-myc 癌基因产物(c-myc),再与HRP 标记的c-myc 癌基因产物(c-myc)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的c-myc 癌基因产物(c-myc)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人c-myc 癌基因产物(c-myc)浓度。" | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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1.准备试剂,样品和标准品 2.加入准备好的样品和标准品,37℃反应30分钟 3.洗板5次,加入酶标试剂,37℃反应30分钟 4.洗板5次,加入显色液A、B,37℃显色10分钟 5.加入终止液 6.15分钟之内读OD值 7.计算 |
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1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。 3. 尿液:用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。 4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。 5. 培养细胞:检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 6. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。 7. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 8.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 |